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维生素 B5 (泛酸)检测试剂盒

检测项目:营养成分

适用样本:奶粉

规格
96T/盒
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产品介绍
概述

适用范围 

维生素 B5 (泛酸)检测试剂盒适用于奶粉中添加泛酸(维生素B5)含量的定量分析。该试剂盒可进行96次测定。 

实验原理

泛酸(维生素B5)检测试剂盒采用微生物方法定量检测奶粉中添加泛酸的含量。微生物检测体系与国际规范保持一致。植物乳杆菌的生长离不开泛酸,其生长强度与样品中泛酸的含量有关,将含有植物乳杆菌的泛酸检测培养基、样品或标品加入到微孔中,37℃避光孵育,植物乳杆菌开始生长,直至泛酸被完全消耗,24小时完成孵育。采用酶标仪读取610-630nm或540-550nm下样品的浑浊度,将样品浊度与标准曲线对比即可得到样品中泛酸含量。

检测步骤

1、标准品配制 

1)打开无菌水瓶盖:沿着箭头方向向上推开蓝色盖帽,逆时针拉开铝塑盖,取下整个盖帽,然后打开瓶塞,将瓶塞内侧朝上放置。

2)打开泛酸钙标准品瓶盖,取xmL无菌水加入标准品瓶中(x值见标准品瓶包装标签),盖上瓶盖,振荡使标准品充分溶解,即为标准品工作液。

3)取6个无菌管(1.5或2.0mL),将标准品工作液按照说明书表格进行稀释。标准品必须现配现用。 

 *标注曲线中已经包含样品40倍的提取稀释倍数。 

2、检测培养基的配制 

1)打开培养基瓶盖,用无菌镊子取出干燥剂并丢弃。 

2)将10mL无菌水(必须取自试剂盒中)加入泛酸检测培养基瓶中,盖紧瓶盖,振荡混匀。 

3)保证瓶盖密闭的前体下,95℃水浴加热5min,然后快速冷却至室温(低于30℃)。 

4)使用0.22μm无菌滤膜过滤全部培养基,用15mL无菌离心管收集全部滤液。 

5)取出冻干菌株,沿着箭头方向向上推开蓝色盖帽,逆时针拉开铝塑盖,取下整个盖帽,轻轻打开瓶塞,将瓶塞内侧朝上放置;向菌株瓶内加入1mL无菌水(必须取自试剂盒中),用移液枪吹打混匀,取其中的YmL(Y值见菌株包装瓶标签)加入过滤后的培养基中,振荡混匀,即为检测菌液(检测菌液须现配现用)。 

注:如果培养基在处理的过程中出现较大体积的损失时,加入的冻干菌株体积需要做相应比例的调整。为杜绝实验室污染,菌株瓶中剩余的菌再用瓶塞密封,及时清理出实验室或者高压灭菌处理;制备的检测菌液如有剩余,也需要及时清理出实验室或者高压灭菌处理。 

3、检测步骤

注:加入微孔板中的样品必须为无菌样品(使用试剂盒中提供的无菌水进行稀释)。 

1)取出所需数量的微孔条置于微孔架上,将剩余微孔板条放回铝箔袋中密封,2-8℃储存。 

2)依次将140μL标准品或样品、140μL检测菌液加入微孔中(用标准品或样品溶液润洗枪头),然后用粘胶薄膜盖好微孔条(揭开粘胶薄膜的保护层,用手或压舌板将粘胶薄膜压平,使其充分封闭微孔板条)。注:保证粘胶薄膜和微孔的封闭性,特别注意微孔的边缘部分。 

3)在37℃培养箱中避光孵育24小时。 

4)轻轻来回颠倒混匀微孔板,使菌液充分混匀,然后用一只手将微孔条固定于微孔架上,另一只手自右上方沿对角揭开粘胶薄膜,静置2min待气泡全部消去(较难消去的小气泡用移液枪吸出)后用酶标仪在610-630nm或540-550nm下测量浑浊度。 

注:孵育完成后,微孔板可在冰箱中保存的最长时间为48h,然后用酶标仪读数。

注意事项
1)试剂盒应在2-8℃储存,产品过期后请勿使用。 2)加入微孔板中的样品必须无菌,样品稀释时必须使用试剂盒中提供的无菌水。样品提取后必须在无菌的环境中进行操作,且实验中需要的其他耗材也必须无菌。 3)检测培养基会刺激眼睛、皮肤和黏膜,应小心使用。 4)试验完成后必须按照规章对微孔条进行处理(如高压灭菌)。 5)为确定样品中是否存在抑制因素,应进行回收率测定。提取之前,向样品中加入已知浓度的泛酸溶液,回收率应约为80-120%。当回收率较低时,表明存在抑制因素,应增加样品稀释倍数以消除抑制因素的影响。
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