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作为焦点的“致泻大肠埃希氏菌”,究竟该如何检测?

2021-12-03 16:35浏览量:40

GB29921-2021《食品安全国家标准 预包装食品中致病菌限量》于2021年9月7日发布,2021年11月22日实施。“致泻大肠埃希氏菌”突然就成了焦点!

在2013版本中,原检测项目为大肠埃希氏菌O157:H7/NM。然而随着对致泻大肠埃希氏菌检验、鉴定能力的提升,越来越多的由其引起的暴发和病例被识别出来,其导致的疾病负担以往也可能被低估。我国食源性疾病监测结果显示,近几年细菌性食源性疾病暴发事件中致泻大肠埃希氏菌引起的事件数已经上升到第五位,高危食品主要为肉制品、蔬菜、水果等。

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2021版标准修订将“大肠埃希氏菌O157:H7”修改为“致泻大肠埃希氏菌”,并对肉制品中的牛肉制品、即食生肉制品、发酵肉制品类,即食果蔬制品中的去皮或预切的水果、去皮或预切的蔬菜及上述类别混合食品规定了限量要求n=5,c=0,m=0/25g。

(来源:食品安全国家标准数据检索平台)

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致泻大肠埃希氏菌是什么?

致泻大肠埃希氏菌是一类能引起人体以腹泻为主的大肠埃希氏菌,可经过污染食物引起人类发病。常见的致泻大肠埃希氏菌主要包括:

肠道致病性大肠埃希氏菌EPEC

肠道侵袭性大肠埃希氏菌EIEC

产肠毒素大肠埃希氏菌ETEC

产志贺毒素大肠埃希氏菌STEC(包括肠道出血性大肠埃希氏菌EHEC)

肠道集聚性大肠埃希氏菌EAEC


致泻大肠埃希氏菌如何检测?

GB4789.6-2016致泻大肠埃希氏菌检验流程:

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目前国标PCR确认试验方法为普通PCR法。

接下来带大家了解一下美正的两种PCR检测方案>>

1. 普通PCR检测流程及产品介绍

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2. 荧光定量PCR检测流程及产品介绍

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致泻大肠埃希氏菌检测注意事项及常见问题>>


操作注意事项  

(1)PCR鉴定前需将菌纯化于非选择性的固体培养基上;

(2)所有PCR操作需严格分区,不同区域内仪器物品不可混用;

(3)所有冷冻试剂使用前需融化混匀短暂离心后开盖使用;

(4)试剂避免反复冻融,大体积试剂可配置后小体积分装冷冻;

(5)操作需要带手套,不可使用带荧光物质或者是带粉末的手套;

(6)提核酸加热后需冷却到室温后在开盖操作,避免气溶胶污染;

(7)PCR管及管盖上不可使用记号笔标记;

(8)不同批次试剂盒试剂不可混用;

(9)严格按照试剂盒说明书设定反应参数和荧光通道。

  用荧光定量PCR符合标准要求吗?  

答:这个不好说,一般按照不同的评审员的理解来要求。多数评审员应该会算是一种方法偏离吧。但是荧光定量PCR在技术上肯定是更先进的,至少明显降低了污染风险和生物安全风险,是今后食品微生物学检验技术的发展方向。GB 4789.6-2016的6.5.8条款:如用商品化PCR试剂盒或多重聚合酶链反应(MPCR)试剂盒,应按照试剂盒说明书进行操作和结果判定。这时候,我使用商品化荧光定量PCR试剂盒,是不是就可以按照试剂盒说明书进行了?大家可以探讨一下。

现在的食品实验室是否可以通过改装成分子实验室?食品检测的BSL-II室可以和PCR实验室共用吗?  

答:食品实验室本来就可以包括分子实验部分。所以,常规食品微生物检测的生物安全二级实验室可以和PCR实验室共用。但是,因为生物安全二级实验室必须是负压或者常压,而PCR实验室是相对正压,还有人流物流的多次进进出出,在防止交叉污染方面比较辛苦。最好还是不要合并使用。

美正可提供“致泻大肠埃希氏菌”从前处理及增菌培养到PCR确认试验整体解决方案,并提供全程技术支持培训服务。

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