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河豚毒素的检测方法,你知道吗?

2022-05-19 11:48浏览量:720

       河豚毒素为自然界最强毒素之一,220摄氏度以上才能分解。毒性相当于砒霜的1250倍,只需要0.48毫克就能致人死命。其毒素主要有河豚毒和河豚酸两种,属于神经毒素的一种,呕吐、神经麻痹、四肢发冷,进而心跳和呼吸停止。


       我国《水产品卫生管理办法》明确规定:河豚鱼有剧毒,不得流入市场,这使河豚毒素检测越来越为人们所重视。接下来小编带你了解河豚毒素常见的5种检测方法:


1.小鼠生物法

       是最原始、最直观的检测方法,通过小鼠死亡前所呈现出的典型的河豚毒素中毒症状,可迅速地将河豚毒素与其它致死性物质区分开。其原理是,根据小鼠注射试样提取液后的死亡时间,查出鼠单位,并按照小鼠体重校正单位,计算确定河豚毒素含量。此方法测得的毒力用小鼠单位来表示。

       优点:小鼠法不需要特殊装置,操作简便,适用于基层检验。

       缺点:计算方式复杂,重复性差、费时费力,个体差异大、重现性不好,而且需有一定规模才能客观反映实验结果。

 

2.液相色谱-串联质谱法

       试样经提取后利用免疫亲和柱净化,利用液相色谱将混合物进行分离,对分离的组分进行质谱检测,能同时进行定性定量分析。外标法定量,本方法的检测限为1μg/kg,定量限为3μg/kg。

       优点:灵敏性高,对样品的适用性广,不需要衍生化,大大简化了分析工作量。能准确的定量分析河豚毒素,分析结果具权威性。

       缺点:分析时间长、分析过程复杂、检测费用高、专用仪器昂贵、对样品的纯度要求较高。


3.液相色谱-荧光检测法

       试样经提取后利用免疫亲和柱净化,液相色谱——柱后衍生荧光法测定,以保留时间定性,外标法定量。本方法的检测限为50μg/kg,定量限为150μg/kg。

       优点:较其他方法灵敏度高,较液相色谱-串联质谱法灵敏度低,对样品的适用性广。

       缺点:TTX没有荧光吸收,先要衍生化成具有荧光吸收的物质,需衍生装置,操作比较繁琐。

 

4.酶联免疫吸附法(ELISA)

       试样中的河豚毒素经提取、脱脂后与一定量的固相抗原竞争结合一定量的抗体,加入酶标二抗反应,最后加入显色液,显色深浅与试样中待测河豚毒素含量呈负相关,试样中河豚毒素含量越高,显色越浅。

       优点:酶联免疫吸附法快速、灵敏,不需要复杂和昂贵的仪器,可以实现大量样本的初筛工作,满足现场工作的需要。

       缺点:严格来讲,此方法为半定量检测。

 

5.胶体金法

       试样经提取液提取,离心后取上清待测。其原理为待测液中的抗原与NC膜上的预划的抗原竞争结合一定量的抗体,导致CT线呈现出不同的显色水平。将待测液滴加至检测卡的加样孔中,一定时间后根据CT线的显色情况进行检测结果的判读。

       优点:检测方便,耗时短,效率高,单个样本检测仅需10-15min,可以满足大量样本的初筛工作。

       缺点:检测结果为定性判读,无法得到具体含量数值。

 

       除上面常规的检测方法外,国内报道的还有分光光度计法、薄层层析法、高效毛细管区带电泳法等方法。这些方法准确度不高,操作相对复杂。国外也有柱转换液相色谱/质谱/电喷雾法、薄层层析/快原子轰击质谱法、亲水作用色谱-电喷雾质谱法、电喷雾离子化质谱法等方法的报道,这些方法所需仪器设备都昂贵,也不便于普遍推广。

       目前河豚毒素检测方法多种多样,各有优缺点,大家应根据需要选择合适的检测方法。


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